詳細介紹
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
枯草芽孢桿菌PCR檢測試劑盒廠家 | Bacillus subtilisPCR | BK-P8857 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環(huán)擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
禽膽/Bile salt from poultryBR25克國產/進口
Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經瘤細胞)5×106cells/瓶×2
OS-RC-2(人腎細胞)5×106cells/瓶×2gersion
中國臺灣霉 Rhizopus formosensis清酒酵母 Saccharomyces sake
奇異變形桿菌 Proteus mirabilis
豇豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium vignaNCI-H446(人小細胞肺細胞)
TMB(可溶型)粉末1g國產
腸堿性酶(ALPI)重組蛋白英文名稱:Recombinant Alkaline Phosphatase, Intestinal (ALPI)
MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14)5×106cells/瓶×2
球菌屬 Lactococcus sp.釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
PA317(小鼠成纖維細胞)5×106cells/瓶×2gersion
枯草芽孢桿菌PCR檢測試劑盒廠家2-氯-3--4-甲吡 142.59 2- -3- amino -4-*:133627-45-9分子量: C6H7ClN2
2-羥-4-(三氟甲)嘧 164.09 2- hydroxy -4- (three f)*:104048-92-2分子量: C5H3F3N2O
2-噻吩三氟酸鉀 190.03 2- thiophene based three potassium fluoride*:906674-55-3分子量: C4H3BF3KS
異硫熒光素(FITC-I) Fluorescein isocyanate (FITC-I) 389.39分子量: C21H11NO5S*:3326-32-7
3-溴酸 200.5 3- bromo piperidine hydrochloride*:102776-55-6分子量: C5H11BrClN
嘧 80.09 Pyrimidine*:289-95-2分子量: C4H4N2
聚二甲硅烷擔載的鈀/氧鋁混合催 Mixed catalysis of palladium / alumina supported by poly two methyl silane 分子量:*:P2280
6--4-羥喹啉 271.05 6- hydroxy -4-*:342617-07-6分子量: C9H6INO
2-噻唑 161.22 2- phenylthiazole*:1826-11-5分子量: C9H7NS
4,4-二聯 406 4,4- two*:3001-15-8分子量: C12H8I2
2-氯-4-吲哚-甲 252.48 2- -4- - methyl phenyl*:83846-48-4分子量: C7H6ClI
產品咨詢
聯系我們
上海帛科生物技術有限公司 公司地址:上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661 號24棟 技術支持:環(huán)保在線掃一掃 更多精彩
微信二維碼
網站二維碼